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基因治疗
 

  基因导入细胞常用方法

  目的基因克隆的筛选与鉴定

  基因治疗的现状与前景

  基因治疗 Gene Therapy



  

  

  

 

 
   基因治疗 Gene Therapy

  

  一、基因治疗的概念和策略 [详细]

  二、基因治疗的基本程序

   (一) 目的基因的选择和制备

  基因治疗的首要问题是选择用于治疗疾病的目的基因。对遗传病而言只要已经研究清楚某种疾病的

发生是由于某个基因的异常所引起的,其野生型基 因就可被用于基因治疗,如用 ADA 基因治疗 ADA 缺

陷病。但在现在的条件下, 仅此是不够的。可用于基因治疗的基因需满足以下几点:在体内仅有少量的

表达就可显著改善症状;该基因的过高表达不会对机体造成危害。很显然某些激素类 基因如与血糖浓度

相关的胰岛素基因目前尚不能用于糖尿病的基因治疗。在抗病毒和病原体的基因治疗中。所选择的靶基因

应在病毒和病原体的生活史和起重要的作用并且该序列是特异的,如针对 HBV 的 HBeAg 或 X 基因等。

肿瘤病人多有免疫缺陷,可选用免疫因子基因转入人体,肿瘤细胞内往往存在多种基因异常形式,可采用

反义技术封闭细胞内活化的癌基因或向细胞内转入野生型抑癌基因,抑制肿瘤生簪,所针对的癌基因或抑

癌基因应下该肿瘤的发生和发展有明确的相关性。在确定欲选目的基因后,就在制备目的基因。正向表达

的基因可以是 cDNA( complementary DNA ),也可是基因组 DNA(genomic DNA) 片段。可用传统的方法

获取,也可采用多聚酶链式反应 (polymerase chain reaction PCR) 等新技术进行体外扩增。部分反义基

因也可采用此法获得,但多数情况下采用人工合成的方式制备。

  (二)基因的转运

  目前已有多种基因转运的方式,其基本原则是将外源基因运到细胞内。已使用的有病毒载体和非病毒

载体两大类。病毒载体:病毒具有一些独特的性质如多数病毒可感染特异的细胞,在细胞内不易降解;

RNA 病毒能整合到染色体以及基因水平较高等。因此病毒载体是良好的基因转运载体。目前已被用作载体

的病毒有逆转录病毒、腺病毒、腺相关的病毒。疱疹病毒和肝炎病毒等。逆转录病毒用作载体时需进行几步

改造:

   (1)  将天然的野生型 RNA 前病毒转变成 DNA 载体,并插入欲转移的相关外源基因。 其基本原则

 是用标记基因和外源基因替代病毒的编码基因,如图 1 所示。

   (2) 制备辅助细胞为载体 DNA 提供其丧失的功能,如图 2 所示。

  (3)将载体 DNA 导入辅助以产生病毒载体。如图 3 。

  (4)病毒载体感染靶细胞,外源基因在细胞内得以表达,如图 4 所示。

  

 
 
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